2 对每个转染样品,进行以下操作
(1)在离心管里分别加入50ul无血清培养基(如OPTI-MEM|培养基)和0.8μgDNA,轻柔混匀,制成DNA稀
释液。
(2)在另一个离心管里分别加入50ul无血清培养基(如OPTI-MEMI培养基)和20ulLip2000(注意用前先混匀),轻柔混匀,制成Lip2000稀释液,室温静置5分钟。
(3)将DNA稀释液和Lip2000 稀释液混合,轻柔混匀,室温静置20分钟,形成DNA-Lip2000 复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
3、将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。
4 在37°CCO,培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18-48小时
5 如果要筛选稳定细胞株,则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中,第二天加入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化:为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化,一般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA(μg)和Lip2000(ul)的比例。