产品简介：

ECL 化学发光底物（特超敏）可为使用辣根过氧化物酶（HRP）偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号和低皮克级检测灵敏度。

该 ECL 底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。

用途：

用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。

产品特点：

1、低皮克级灵敏度：检测硝化纤维素膜或 PVDF 膜上低皮克级的蛋白条带；

2、长信号持续时间：在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6-8小时的可检测光信号；

3、稳定试剂：工作液在 24 小时内保持稳定；

4、成像方法：适用于 X 射线胶片、CCD 或激光凝胶成像仪；

5、价格经济：针对稀释的抗体浓度条件进行了优化：

0.2 至 1.0 µg/mL 一抗（以 1 mg/mL 储存液稀释 1:1,000 至 1:5,000 倍）10 至 50 ng/mL 二抗（以 1 mg/mL 储存液稀释 1:20,000 至 1:100,000 倍）

6、简单易用：可替代其它公司的 ECL 发光底物，操作步骤无需进行特别优化；

使用方法:

1、执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记IgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP 夹法。

2、Western Blot 最后一次洗膜的同时配制发光工作液：分别取等体积的A液和B液，放入干净容器中混合（注意吸取 A 液和 B 液的吸头一定要分开，避免试剂污染）。

    建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3、Western Blot 最后一次洗膜后，用镊子将膜取出，用滤纸吸去多余的洗涤液（切勿接触膜的蛋白面），然后置于一洁净保鲜膜上或塑料容器内。

4、根据膜的大小，按比例滴加配置好的 ECL 工作液到膜上，确保工作液均匀覆盖在膜上，放置 1-3 分钟。

5、取膜，用滤纸吸去多余的液体，将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行压片检测或化学发光成像仪检测。

6、压片检测：将膜固定于 X 光胶片暗盒内（注意蛋白面向上）。暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。

7、化学发光成像仪检测：将膜放置到化学发光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。

注：建议第一次曝光 60 秒，之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前 5-30 min 期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

注意事项：

为获得最佳效果，需优化该系统，包括样品量、一抗和二抗浓度、膜和封闭试剂的类型。

1、没有一种封闭试剂对所有系统而言都是最佳的，所以为每一个免疫印迹检测系统找到最合适的封闭缓冲液非常必需。

2、使用亲和素/生物素检测系统时，避免使用牛奶作为封闭试剂，牛奶中含有的不定量内源性生物素会导致高背景信号。

3、实验中避免印迹膜变干。

4、叠氮钠是 HRP 的抑制物，不要使用叠氮钠作为缓冲液的防腐剂。

5、避免手与膜直接接触，实验过程应戴手套或使用干净的镊子。

6、短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液，但应避免长期暴露在强光下。

保存条件：

室温运输，4 ℃密封避光保存一年，短期可放置室温。

问题解答：

*为检测系统活性，暗室中，在一个清洁试管中制备 1-2ml 工作液。关闭灯，添加 1ul 未稀释的HRP 标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光，蓝光信号在随后的几分钟渐淡。