Cy7 DiC18（DiR）是一个亲脂性、近红外荧光花青染料。这个染料常用于标记细胞质膜。Cy7 DiC18（DiR）的两个 18-碳链插入到细胞膜，从而进行特定的、稳定的细胞染色，几乎不会发生细胞间的染料转移。 Cy7 DiC18（DiR）（近红外荧光）和其他细胞膜荧光染料如 DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）配合使用，为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。 Cy7 DiC18（DiR）染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100透化）后，也可以很好地进行质膜染色。

使用方法（仅供参考）

 染色液制备 

（1）配制储液：储液用无水 DMSO 或无水 EtOH 配制，浓度 1~5 mM。  注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。 

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储液，配制浓度为 1~5 μM 的工作液。 注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。 

悬浮细胞染色 

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×106/mL。 

（2）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的 标记效果。 

（3）孵育结束，1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。 

（4）重复步骤（3）两次以上。 

贴壁细胞染色 

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。 

（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。 

（4）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的 标记效果。 

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5~10 min，然后吸干培养基。 但要使表面保持湿润。

结果检测 

样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。 

注意事项 

Cy7 DiC18（DiR）染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。